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ELISA試劑盒中非特異性顯色的原因
發(fā)布時間： 2014-06-04 點擊次數(shù)： 1380次酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）自問世以來，以其敏感性高，特異性強，操作簡便、安全，開創(chuàng)了免疫學診斷的新紀元在臨床診斷方面得到了廣泛的應用。但是在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會碰到非特異性顯色問題，ELISA試劑盒特異性、檢驗標本中含酶標記物的干擾物，操作不當?shù)纫蛩囟紩е逻@樣的結(jié)果。
影響ELISA中非特異性顯色的原因很多，如試劑盒特異性、檢驗標本中含酶標記物的干擾物，操作過程中的問題。本文就這一原因作一簡要分析,以便可以通過以上措施把非特異顯色降至zui低限度，從而提高檢測的特異性，并得到更準確、可靠的實驗結(jié)果。
1、ELISA試劑盒特異性因素
1、1 固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種，以微量滴定板zui為常見。
1、2包被物的純度。在酶聯(lián)免疫測定尤其是間接ELISA中，試劑的特異性取決于使用抗原的純度。
1、3包被抗體的效價。具有高親和力和高特異性的包被抗體，是決定試劑特異性的重要方面。
1、4 封閉。是ELISA中重要的一步，目的是封閉固相載體表面尚未被所占據(jù)的空隙，減少后續(xù)步驟中非特異性蛋白的干擾。
2、ELISA試劑盒中檢驗標本中含有酶標記物的干擾物
2、1內(nèi)源性干擾物：類風濕因子（RF）、黃疸等，類風濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的自身抗體，多數(shù)為IgM類，能充當抗原成分與固相及酶標抗體反應，從而呈現(xiàn)非特異性顯色。
2、2 外源性干擾物，常常因樣品采集、貯存、處理不當造成如樣品溶血，被細菌污染，標本凝集不全等。溶血標本，紅細胞溶解破裂，釋放出血紅素形成，而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。
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