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我司詳述ELISA實(shí)驗(yàn)失敗之后的解決方案
發(fā)布時(shí)間： 2020-10-14 點(diǎn)擊次數(shù)： 2709次一：試劑因素
1. 首先試劑應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。ELISA試劑盒不同廠家的試劑一定不能混用，包括底物和洗滌液。
2. 由于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)有差異，還有抗體、檢測(cè)方法、試劑、交叉反應(yīng)等因素都會(huì)導(dǎo)致對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果不一致。
如：有的廠家酶標(biāo)板孔間CV值大于20%，標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差，使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽(yáng)性或假陰性。
3. 要注意試劑的批號(hào)和出廠日期，雖然試劑的有效期多為1年，選擇剛出廠的試劑盒。避免選擇假的ELISA試劑盒。有些廠家為夸大生產(chǎn)ELISA的指標(biāo)范圍，用一種指標(biāo)來(lái)冒充其它指標(biāo)，造成各種種屬、各種指標(biāo)都可以做的假象。
4. 比如用TGF beta這樣的指標(biāo)代替大多數(shù)試劑盒的其它指標(biāo)作為檢測(cè)抗體，同樣可以獲得良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)門(mén)GF beta在大多數(shù)哺乳動(dòng)物中都有廣泛表達(dá)，種屬間的氨基酸序列同源性達(dá)100%，TGF beta隨著其他因子的影響，其表達(dá)水平也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化，使得實(shí)驗(yàn)者難以查覺(jué)。
在分析完以上可能出現(xiàn)的因素后，專(zhuān)家給到以下鑒別方法，大家可以直接去搜索如何鑒別真假ELISA試劑盒。
1．利用干擾實(shí)驗(yàn)可辨別ELISA試劑盒是否檢測(cè)目的抗原。
2．如果購(gòu)買(mǎi)了同一公司的ELISA試劑盒A和B，利用交叉實(shí)驗(yàn)可辨別ELISA試劑盒真?zhèn)巍?/p>
3．指標(biāo)本身也可以鑒定試劑盒的真?zhèn)巍?/p>
2．標(biāo)本因素和操作因素
血清是常用的ELISA標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：
二：內(nèi)源性物質(zhì)
有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，ELISA試劑盒可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有：類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
三：外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是由于用于ELISA測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過(guò)久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。
所以，當(dāng)ELISA測(cè)定結(jié)果與預(yù)期或文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)中不一致時(shí)，應(yīng)該首先考慮試劑因素，這個(gè)是做好實(shí)驗(yàn)獲得正確數(shù)據(jù)的前提保證，其次還有標(biāo)本因素和操作因素等多方面進(jìn)行分析，并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用，從而為實(shí)驗(yàn)提供正確可靠的檢測(cè)結(jié)果。