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本周焦點(diǎn) ELISA試驗(yàn)操作失敗的主要原因
發(fā)布時(shí)間： 2019-11-29 點(diǎn)擊次數(shù)： 2191次我們知道，ELISA測(cè)定中影響要素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在查驗(yàn)中除正常反響外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些過(guò)錯(cuò)結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性)，那么致使試驗(yàn)不成功的主要原因有哪些咧？
：標(biāo)本的影響：
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易發(fā)生假陽(yáng)性?；蛟S是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗刷過(guò)程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，發(fā)生假陽(yáng)性。所以嚴(yán)峻溶血標(biāo)本禁用。
第二，標(biāo)本受細(xì)菌污染：因菌體中或許含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，因而，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本相同，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測(cè)定結(jié)果。
第三，標(biāo)本保存不妥：在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、形成假陽(yáng)性；為克服上述攪擾，ELISA試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集；如不能立即測(cè)定，5d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)部分濃縮，分布不均，應(yīng)充沛混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振動(dòng)。
第四，標(biāo)本凝結(jié)不全：在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開(kāi)始凝結(jié)時(shí)即強(qiáng)行離心別離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中能夠形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易形成假陽(yáng)性結(jié)果；因而血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清。