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雙抗夾心ELISA試劑盒的反應(yīng)時(shí)間
發(fā)布時(shí)間： 2019-02-27 點(diǎn)擊次數(shù)： 2114次在保證 ELISA 有效檢測病原菌的前提下，快速方便也是雙抗夾心ELISA的必要條件。雙抗夾心ELISA從加入待測抗原到得出結(jié)果，檢測大腸桿菌 O157:H7 共需要5h左右，而間接ELISA則需要7h(包被 37℃，2h)或 者 17h(包被 4℃guo夜)。本論文篩選出的雙抗夾心ELISA檢測大腸桿菌 O157:H7 省去封閉這一步驟。在間接ELISA測定抗原中，封閉一般是*的，因?yàn)榘徊煌瑵舛瓤乖灰欢梢?覆蓋固相載體表面，如果不封閉，很可能使隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二抗直接被吸附到固相載體上，產(chǎn)生非特異性顯色而使檢測結(jié)果偏高。但是對于雙抗體夾心ELISA來說，在包被捕獲抗體時(shí)已經(jīng)使固相載體飽和，已經(jīng)沒有多余的吸附力來吸附隨后加入的特異性抗體和酶標(biāo)二抗，這都說明 了雙抗夾心ELISA有不需要封閉的可能，通過正交試驗(yàn)結(jié)果也證明不封閉可以達(dá)到理想實(shí)驗(yàn)效果，而且還縮短了整個(gè)檢測流程和時(shí)間，說明只要酶標(biāo)記物是高活性的 并且操作時(shí)洗滌*，不經(jīng)封閉也可得到滿意結(jié)果。雙抗夾心ELISA檢測法的特異性和靈敏性抗原抗體的結(jié)合實(shí)際上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間，由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特 異性。但這種特異性并不是的，假使兩種化合物有著部分相同的結(jié)構(gòu)，在抗原抗體反應(yīng)中可能出現(xiàn)交叉 反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌 O157:H7 及其他菌株共 10 株作 為抗原用來檢測本方法的特異性，結(jié)果顯示大腸桿菌 O157:H7 呈明顯陽性反應(yīng)，其余各菌株均呈陰性反應(yīng)， 說明本方法對大腸桿菌 O157:H7 具有明顯的檢測特異 性，而對所測定的其它菌株無交叉反應(yīng)。
本論文所建立的雙抗夾心ELISA方法對純培養(yǎng)的 大腸桿菌O157:H7檢出限均105CFU/ml，Kerr 和 Chart 等[6]建立的雙抗夾心 ELISA 檢測大腸桿菌 O157:H7 的檢測限為 10 5 CFU/ml ，建立的雙抗夾心ELISA 檢測大腸桿菌 O157:H7的檢測限為 104CFU/ml，兩者均用單克隆抗體作為檢測抗體，而本方法使用IgY 抗體與兔多克隆抗體，制備相對比單克隆抗體簡單，對試劑成本要求也相對降低，其效果基本達(dá)到檢測要求。