酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay），簡(jiǎn)稱ELISA，是實(shí)驗(yàn)室zui常用的檢測(cè)方法。 酶是能夠催化化學(xué)反應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)，其催化效力超過目前所有人造催化劑。ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性，也不改變酶本身的活性。因此ELISA具有準(zhǔn)確性高、檢測(cè)時(shí)間短、價(jià)格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點(diǎn)，適合于大批標(biāo)本的檢測(cè)，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測(cè)、醫(yī)療檢測(cè)以及免疫實(shí)驗(yàn)分析等領(lǐng)域。

核心原理

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)專題

ELISA必須遵守以下3個(gè)核心原理：1）抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性；2）抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關(guān)鍵的作用，常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結(jié)合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結(jié)的產(chǎn)物,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應(yīng)，還能催化酶促反應(yīng)，顯示出生物放大作用。

應(yīng)用方向

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)專題

ELISA應(yīng)用的范圍很廣，而且正在不斷地?cái)U(kuò)大，原則上ELISA可用于檢測(cè)一切抗原、抗體及半抗原，可以直接定量測(cè)定體液中的可溶性抗原。在實(shí)際應(yīng)用方面可用于疾病的臨床診斷、疾病監(jiān)察、疾病普查、法醫(yī)檢查、獸醫(yī)及農(nóng)業(yè)上的植物病害的診斷檢定等。因此，它和生物化學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、藥理學(xué)、流行病學(xué)及傳染病學(xué)等方面密切相關(guān)。按照待測(cè)物性質(zhì)的不同，ELISA反應(yīng)可以分為抗原檢測(cè)反應(yīng)及抗體檢測(cè)反應(yīng)。

在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域上，能夠進(jìn)行檢測(cè)的抗原包括：內(nèi)分泌方面的雌性激素、絨毛膜促性腺激素、黃體素、胰島素、皮質(zhì)醇、促甲狀腺素和孕酮等，血液學(xué)方面的凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、紅細(xì)胞抗原及結(jié)合球蛋白（Hapto Globin）等，腫瘤方面已試用檢查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA），此外還有霍亂弧菌、大腸肝菌、綠膿桿菌和破傷風(fēng)梭菌毒素；腦膜炎球菌及淋球菌抗原；檢測(cè)免疫抑制病人中常見的白色念殊菌抗原，檢測(cè)病人或病獸的糞便中的輪狀病毒；檢測(cè)甲肝病毒、皰疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨細(xì)胞病毒等。

而用ELISA檢測(cè)抗體，已獲得對(duì)多種傳染病和寄生蟲病的血清學(xué)診斷，亦開始廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查。在寄生蟲病方面，它用于對(duì)瘧原蟲、阿米巴、利日曼原蟲、錐蟲、血吸蟲、囊蟲、弓漿蟲、肺吸蟲、肝吸蟲、血絲蟲、旋毛蟲病等血清學(xué)診斷，這對(duì)人醫(yī)和獸醫(yī)都很重要。在病原微生物方面已用于檢測(cè)鏈球菌、沙門氏菌、布氏桿菌、結(jié)核桿菌、麻瘋桿菌、霍亂弧菌、淋球菌、假絲酵母菌等的抗體，還可用于破傷風(fēng)抗毒素和霍亂弧菌抗毒素的測(cè)定以及檢測(cè)斑疹傷寒立克次氏體感染后的抗體作診斷，也可用于對(duì)立克次氏體的種屬鑒別，還有用于檢測(cè)鸚鵡熱衣原體抗體的報(bào)導(dǎo)。ELISA也可應(yīng)用于以下病毒抗體檢測(cè)：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等，其敏感性都超過目前常用的檢測(cè)方法。此外，還可用于鑒定病毒型別，例如皰疹病毒。在免疫性疾病方面有試用作自身疫病抗體測(cè)定以及對(duì)過敏的診斷，例如檢測(cè)各種過敏原的抗體、DNA抗體及甲狀腺球蛋白抗體，紅斑性痕瘡抗體等等。在衛(wèi)生學(xué)方面，可用于檢測(cè)食品中葡萄球菌腸毒素及沙門氏菌毒素等等。