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ELISA中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
發(fā)布時(shí)間： 2017-09-08 點(diǎn)擊次數(shù)： 2901次研域生物推出ELISA試劑盒代測(cè)：ELISA中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
elisa實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的運(yùn)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)作用影響較大，如不留意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
下面分析Elisa實(shí)驗(yàn)操作中可能影響成果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法
1. 孵育
可能原因： ①孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*; ②孵育時(shí)刻人為延伸，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周?chē)?，難以清洗*。
解決辦法：①貼封片或加蓋; ②按說(shuō)明過(guò)程嚴(yán)厲控制操作時(shí)刻。
2. 洗板
可能原因：①選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。②選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量缺乏，導(dǎo)致洗板不*;洗板針阻塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板作用差。③反響板過(guò)多形成洗板等候時(shí)刻長(zhǎng)。
解決辦法： ①確保洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無(wú)或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; ②合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
3. 顯色
可能原因：①顯色劑制造后放置時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)或運(yùn)用過(guò)期顯色劑; ②加顯色劑時(shí)濺起孔外形成液體回流。
解決辦法：①顯色劑盡量在臨用前制造，堅(jiān)持不期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不必;②加樣時(shí)保持顯色劑不外流; ③A、B液應(yīng)防止觸摸金屬器械。
4. 挑選試劑
挑選質(zhì)量的檢測(cè)試劑，嚴(yán)厲依照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
5 加樣
可能原因：①血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣;②手藝操作中，加樣板過(guò)多形成加樣后放入孵箱前等候時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));③加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
解決辦法：①標(biāo)本為血清：將血液先天然寄存1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：有必要運(yùn)用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管，采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次，放置一段時(shí)刻后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要儲(chǔ)存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。② 加樣后及時(shí)放入孵箱。③加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。④如果選用AT或其他全自動(dòng)加樣，挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。⑤標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
6. 停止
可能原因如加停止液時(shí)發(fā)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加停止液時(shí)應(yīng)防止發(fā)生氣泡。
7. 讀板
如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)確保酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中確保酶標(biāo)板不觸摸次氯酸;盡可能完成ELISA檢測(cè)規(guī)范自動(dòng)化，有效進(jìn)步檢測(cè)質(zhì)量。
在實(shí)際操作中，除了挑選試劑外，有必要嚴(yán)厲依照操作過(guò)程進(jìn)行操作，一起作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以謹(jǐn)慎的工作作風(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才干確保檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有適當(dāng)數(shù)量的單位具有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這關(guān)于完成ELISA試劑盒規(guī)范化檢測(cè)、進(jìn)步檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。